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流式细胞术118图库彩图印刷区基础事理详版(医学关联)

发布时间:2020-01-12   浏览次数:

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  流式细胞术基本旨趣 陈晓东 产品技术专员 广州市珈源医学试剂有限公司 流式细胞术 ? 流式细胞术(Flow Cytometry, 简称FCM)是一种 或者快快、切实、客观,况且同时检测单个微粒 (遍及是细胞)的多项性子的本领,同时不妨对特 定群体加以分选 ? 参议方向为生物颗粒,如各类细胞、染色体、微生 物、及人工闭成微球等 ? 探究的微粒性子征求多种物理及生物学特质,并加 以定量 2 流式细胞仪的特性 单个细胞/生物颗粒贯通 同时多参数、多荧光分析 高通量检测/高速度 10000个细胞/秒以上 定性/定量体验 分选特定性状或效用的细胞 可检测的样本种类各式 (1)外周血,骨髓,细针穿刺,洗脱液,实体 组织,118图库彩图印刷区教育细胞 (2)血清、血浆、培植上清、细胞裂解液 3 目前流式细胞仪或者检测的类别 细菌 浮游生物 红细胞 DM:0.2μ m ——15μ m 单核细胞 4 淋巴细胞 中性粒细胞 5 流式细胞仪的基本组织 轰动室与液流体例:将 细胞单个压入颤栗室 光学滤镜 灯号征求与数据 办理体例 激光发射器 发出所须要的波长的激光 光源与光学体例 侧向散射光检测器 前向散射光检测器 6 活动室 Injector Tip 鞘液 荧光暗记 聚焦的激光光束 7 光学滤片 — 当光子遇到滤片时,光子或经验滤片,或被滤片罗致 ,或被滤片反射。 8 光学滤片的种类 ? 长通滤片(LP):630LP ? 短通滤片(SP):550SP ? 带通滤片(BP): 488/10 9 10 流式细胞仪可得回的记号种类 共有两类:散射暗号与荧光记号 —前向角散射灯号(FSC) 响应细胞大小 —侧向角散射信号(SSC) 反应细胞颗粒度 —荧光灯号(FL Signals)(FL1、2、3……) 胞内、胞外染色境况 11 流式细胞仪出现图的种类 FSC和SSC 直方图 12 散点图 把前向散射光图和侧 向散射光图的一维图 像在二维图像上投影, 便是他们遍及所看到 的流式图。得意颂:曲筱绡睡着了关合用头发嘲弄她都醒不来这是多困啊四海图, 于是横坐标呈现的是 细胞的直径大小;纵 坐标流露的是细胞的 芜乱水准。 两者相咸集就能表明 细胞种类 13 二维等高图和密度图 14 Pseudo 3D Plot 假三维图与三维图 15 3D Plot 流式细胞仪怎样得到细胞暗号? —FSC —SSC —FL 16 — 前向角密码(Forward Scatter,FSC) 17 前向角密码:细胞的大小 18 10 1000 Count Count FSC 19 FSC — 侧向角旗号(Side Scatter, SSC) 20 10 1000 Count Count SSC 21 SSC FL 22 count FL 23 FSC、SSC、FL 24 若何折柳90°角内的各类荧光信号? 25 荧光染料 —招揽某一波长的光波后能发射出大于吸收光波 长的光波的物质 488n 激励光 600nm PI 26 荧光染料种类 荧光染料 慰勉波长 (nm) 发射波长(nm) 用路 FITC 488 525 免疫荧光 PE(RD1) 488 575 免疫荧光 PerCP 488 670 免疫荧光 PI 488 620 DNA染色 ECD 488 620 免疫荧光 PeCy5 488 675 免疫荧光 APC 633 670 免疫荧光 DAPI 359 462 DNA染色 脸色 绿色 橙色 血色 橙红 橙红 赤色 红色 蓝色 27 荧光染料光谱特色 28 荧光别离规定 — 在流式细胞仪中,平凡资历LP或SP滤片将荧光大 致分开后,再履历一BP滤片分别出特性荧光 29 流式细胞仪的光道 盛开式光途 Calibur、Influx 30 关关式光路(CantoⅡ、LSR系列、Aria系列) 31 分选 —将目的细胞 分袂并富集 ,实行后续 参议。 —分选纯度 99% 32 波动 激光 33 偏转板 Fluorescence Activated Cell Sorting 488 nm laser FALS Sensor Fluorescence detector - Charged Plates + Single cells sorted into test tubes 34 几个概想 ? 信号夸诞模式 ? 密码典范 ? CV值 ? 样本流速 ? 激光延迟 ? 液滴延迟 ? 荧光增加 ? 阈值 ?门 ? 比拟 35 —暗记妄诞 – PMT将光信号改造成电灯号,安排PMT的电压, 信号强度将随之转变 光密码 光电倍增管(PMT) 电密码 夸张器 扩充器两种扩充花式: ? 线性夸张(lin) ? 对数扩充(log) 36 线性延长(lin) —按光强度的线性关系输出灯号.闭用于在较小 边境内转化的暗记以及代表生物原委的密码, 如DNA含量、总蛋白含量等。 37 对数扩大(log) —按光强度的对数相闭输出旗号.在免疫学测量 中普遍行使对数放大。 38 电脉冲暗记模范 —将与电脉冲灯号 强弱关联的电压 数字化 —有三类电脉冲暗记 – 高度密码H – 面积灯号A – 宽度信号W 39 CV值 CV值(变异系数): 样品均一度及仪器辞别率的符号 CV值泛泛2% 40 样本流速 41 样本流快挑选 —高流速:平常用于定性分解,如免疫分型。采 集速度快,但区分率低. —低流速:通俗用于对阔别率吁请较高的认识, 如DNA意会。 42 激光延伸(laser delay) Laser 1 Laser 2 43 液滴延长(drop delay) 44 神态填补 —拣选适当的妙技订正荧光染料之间叠加所酿成 的差错。在完成双色以上荧光标志的样本时

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